RNA的提取方法總匯2024/05/13

獲得高質(zhì)量的RNA是進行很多分子實驗（RT-qPCR，二代測序轉(zhuǎn)錄組分析，芯片分析，數(shù)字PCR，northem分析及cDNA文庫構(gòu)建等）的第一步，往往也是最關(guān)鍵的一步，下面主要講解的是RNA的八種提取方法。1、熱酚法本法主要用于少量細胞樣品RNA提取，其產(chǎn)量不高，但簡單易行。2、快速提取法本法主要用于培養(yǎng)細胞，通過0.5%SDS裂解細胞，酚抽提去除蛋白質(zhì)和DNA沉淀，快速純化RNA。3、鹽酸胍-有機溶劑法本法由MacDonald1987年在Strohman報道的方法基礎(chǔ)上改進而成的，適用于沒有超

標準物質(zhì)管理使用規(guī)范2024/05/06

標準物質(zhì)一般是指一種確定了具有一個或多個足夠均勻的特性值的物質(zhì)或材料，作為分析測量行業(yè)中的“量具'，在校準測量儀器和裝置、評價測量分析方法、測量物質(zhì)或材料特性值和考核分析人員的操作技術(shù)水平，以及在過程中產(chǎn)品的質(zhì)量控制等領(lǐng)域起著*的作用。企業(yè)或?qū)嶒炇覒斀藴饰镔|(zhì)的科學管理制度，以保證標準物質(zhì)全流程的可追溯性、使信息傳遞正確有效，保證流轉(zhuǎn)過程數(shù)量和貯存準確、讓使用更規(guī)范與合理。一、標準物質(zhì)來源合法，可追溯對標準物質(zhì)的原材料選擇、制備方法、標定方法、標定結(jié)果、定值準確性、量值溯源、穩(wěn)定性等過程進行

QR-PCR探針法技術(shù)原理講解2024/04/28

目前主流的實時熒光定量PCR（QuantitativeReal-timePCR）方法分為染料法和探針法，染料法以SYBRGreen法為代表，SYBRGreen染料游離時熒光微弱，但但一旦與雙鏈DNA結(jié)合后，熒光大大增強，反應管中的熒光強度與反應管中雙鏈DNA的數(shù)量成正比例關(guān)系，因此熒光定量pcr實驗步驟可以通過檢測熒光計算反應管中產(chǎn)生的雙鏈DNA（PCR產(chǎn)物）的量，但該方法沒有特異性，非特異性擴增的產(chǎn)物也會被計入。對于探針法來說，反應管中的熒光強度也是檢測PCR產(chǎn)物量的依據(jù)。但其發(fā)光機制卻與染料

ELISA酶聯(lián)免疫吸附測定呈色反應色彩分析2024/04/22

ELISA又稱酶聯(lián)免疫吸附測定，是定量檢測體液中各種靶標蛋白含量的常用方法。其呈色反應可進行定性或定量分析，利用HRP酶催化TMB，反應產(chǎn)生藍色亞胺溶液，加入終止液后，使藍色陽離子轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色的聯(lián)苯醌。除了常見的藍色和黃色，ELISA實驗過程中，也會出現(xiàn)一些不同尋常的多樣色彩。一、墨綠色/深藍色例：加入底物溶液孵育后，酶標板孔溶液變成墨綠色或深藍色。在正常的ELISA實驗中，加入底物溶液孵育后，標曲前四孔出現(xiàn)明顯藍色梯度，即可終止反應。但是，當孵育的HRP酶結(jié)合物工作液濃度過高，或樣本濃度遠高于檢

實驗室ELISA封閉劑特性介紹2024/04/16

酶聯(lián)免疫吸附測定（Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay，ELISA）是免疫學和分子生物學中廣泛使用的實驗室技術(shù)，是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識別和結(jié)合原理，對待測抗體或者抗原進行分析測定的方法。封閉（blocking）是繼包被之后用高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過程?？乖蚩贵w包被時所用的濃度較低，吸收后固相載體表面尚有未被占據(jù)的空隙，封閉就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙，從而排斥在ELISA試劑盒其后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。在免疫學實

細胞不貼壁的原因及解決方案參考2024/04/08

細胞貼壁是細胞（除腫瘤細胞外）在體外培養(yǎng)條件下，完成貼壁后均為單層生長，原因是貼壁細胞有接觸性抑制的特點。一般認為接觸抑制是細胞間的一種識別作用，對于動物細胞的形態(tài)形成與穩(wěn)定具有重要性的作用。由于貼壁細胞的一面是緊貼在培養(yǎng)瓶上的，如果其上方存在細胞與其相粘附，那么下方的細胞很快就會缺乏營養(yǎng)餓死。不貼壁的一些原因：1.胰酶消化時間把控不當：消化不夠細胞本身就是成團的；若胰酶處理太久，容易造成細胞膜蛋白損傷，使細胞貼壁不緊，顯微鏡下觀察立體感不強，嚴重的時候甚至會造成細胞死亡。2.缺少貼壁因子：血清

抗體特異性選擇參考要素2024/04/01

抗體(antibody)免疫細胞分泌免疫物質(zhì)，是哺乳動物適應性免疫系統(tǒng)對抗病原體的核心，它是在病原體刺激下由漿細胞（效應B細胞）所分泌的一種免疫球蛋白，能夠識別并結(jié)合特異的病原體抗原，隨后通過介導中和作用、調(diào)理作用、效應T細胞殺傷等來清除病原體。隨著抗體制備與改造技術(shù)的飛速發(fā)展，抗體已經(jīng)廣泛應用于生命科學各個領(lǐng)域，包括科學研究、診斷、治療等。特異性（specificity）的本質(zhì)含義是“Connectedwithoneparticularthingonly"即只與唯yi的特定事物相關(guān)，具有專一性

RNA提取方法全面解說2024/03/25

探針法熒光定量RT-PCR試劑盒技術(shù)是一種基于實時熒光標記的定量PCR技術(shù)，可以精確地測定目標RNA的表達量。而要正確地進行探針法熒光定量RT-PCR實驗，首先需要提取高質(zhì)量的RNA。下文將詳細介紹探針法熒光定量RT-PCR試劑盒的RNA提取方法的分類、原理、操作流程和注意事項。一、RNA提取方法的分類與原理:RNA提取方法可以根據(jù)提取液的種類、提取步驟的數(shù)量和提取原理等方面進行分類。根據(jù)提取液的種類，RNA提取方法可分為有機溶劑法和離子交換法。有機溶劑法是利用有機溶劑，如異丙醇、乙醇等，沉淀核

逆轉(zhuǎn)錄實驗必看重難點分享2024/03/18

逆轉(zhuǎn)錄（reversetranscription），是以RNA為模板合成DNA的過程，合成的DNA稱為cDNA。逆轉(zhuǎn)錄過程遺傳信息的流動方向為RNA到DNA，與轉(zhuǎn)錄過程DNA到RNA的方向相反，故稱為逆轉(zhuǎn)錄。一、實驗原理要素：酶促催化使RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA第一鏈。一條寡聚脫氧核苷酸引物先與RNA雜交，然后由RNA依賴的DNA聚合酶催化合成相應互補的cDNA拷貝，后者能進一步用于PCR擴增。依據(jù)實驗的不同目的，針對cDNA第一鏈合成的引物可根據(jù)特殊的靶基因設(shè)計，或可用隨機引物與所有mRNA雜交。

標準物質(zhì)的定值及常見問題解答2024/03/11

標準物質(zhì)(RM)referencematerial(RM)：是一種已經(jīng)確定了具有一個或多個足夠均勻的特性值的物質(zhì)或材料，作為分析測量行業(yè)中的“量具"，在校準測量儀器和裝置、評價測量分析方法、測量物質(zhì)或材料特性值和考核分析人員的操作技術(shù)水平，以及在過程中產(chǎn)品的質(zhì)量控制等領(lǐng)域起著重要的作用。標準物質(zhì)的基本要求有以下三點：第一是穩(wěn)定性，即標準物質(zhì)在使用期間，其量值應該是穩(wěn)定不變的；第二，均勻性，即物質(zhì)各部分之間特性量值的差異不能用實驗方法檢測出來；第三，量值準確性，即標準值與真值的偏離不超過不確定度。

實驗室質(zhì)量控制主要需主要方面闡述2024/03/04

為了確保檢測數(shù)據(jù)的準確可靠，以保證檢測報告的質(zhì)量，在檢驗檢測工作中必須有一個質(zhì)量控制的過程，必須明確質(zhì)量控制各階段可能影響檢測報告的各項因素。從而對這些因素采取相應的措施加以管理和控制，以使其過程處于受控狀態(tài)。主要從實驗室環(huán)境、設(shè)備、樣品等方面進行質(zhì)量控制。一、環(huán)境質(zhì)量的控制1.檢測場所的環(huán)境條件應滿足檢測工作的需要，應采取措施確保實驗室的內(nèi)務良好，必要時制定專門的工作程序。對影響分析檢測質(zhì)量的區(qū)域加以控制，限制進入或使用該區(qū)域，并根據(jù)其特定的情況確定控制的程度。將不相容活動的相鄰區(qū)域進行有效隔

培養(yǎng)基的制備和性能測試分述2024/02/26

培養(yǎng)基是液體、半固體或固體形式的，含天然或合成成分，用于保證微生物繁殖或保持其活力的物質(zhì)。培養(yǎng)基的制備和使用是微生物實驗室檢測工作的重要環(huán)節(jié)，培養(yǎng)基自身質(zhì)量的優(yōu)劣、保存是否得當、配制使用是否正確等都直接影響到檢測結(jié)果的準確性。公司對微生物實驗室在培養(yǎng)基購置、貯存、制備、使用等方面應采取的質(zhì)量控制措施進行討論，提一些建議。希望有助于微生物檢測工作的同行們更好的開展工作。干粉培養(yǎng)基應保存在陰涼干燥處，要避免陽光直射;未開瓶的培養(yǎng)基在室溫下的最長保存2年，開瓶后的干粉培養(yǎng)基易吸濕，應注意防潮并在6個月

ELISA實驗洗滌優(yōu)化關(guān)鍵點小結(jié)2024/02/19

優(yōu)化ELISA的重點之一在于洗滌。洗滌步驟可降低未結(jié)合抗體所引起的背景信號，從而增加分析的信噪比。每一步之間的洗滌確保只有特異的結(jié)合事件被保留，在最后一步產(chǎn)生信號。而不充分的洗滌會導致差異和高背景，從而帶來不理想的結(jié)果。下面將為你介紹一些利用自動洗板機來洗滌ELISA平板的技巧。免疫分析，比如ELISA，一般包含兩個或以上的孵育步驟，中間以洗滌隔開。ELISA通常在96孔板中開展，其上包被了結(jié)合抗原或抗體。在封閉步驟后，包被后的平板首先與一抗或抗原孵育。隨后通過一些洗滌步驟去除未結(jié)合（低親和力）

免疫組化實驗步驟及問題解答2024/02/05

免疫組化基本原理是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來確定組織細胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì))，對其進行定位、定性及定量的研究。1、脫蠟和水化：脫蠟前應將組織芯片在室溫中放置60分鐘或60℃恒溫箱中烘烤20分鐘。a、組織芯片置于二甲苯中浸泡10分鐘,更換二甲苯后在浸泡10分鐘b、無水乙醇中浸泡五分鐘c、95%乙醇中浸泡五分鐘d、75%乙醇中浸泡五分鐘2、抗原修復：用于福爾馬林固定的石蠟包埋組織芯片：A、抗原熱修復a、高壓熱修復：在沸水中加

實驗室細胞貼壁問題探究2024/01/29

細胞貼壁細胞（除腫瘤細胞外）在體外培養(yǎng)條件下，完成貼壁后均為單層生長，原因是貼壁細胞有接觸性抑制的特點。一般認為接觸抑制是細胞間的一種識別作用，對于動物細胞的形態(tài)形成與穩(wěn)定具有重要性的作用。由于貼壁細胞的一面是緊貼在培養(yǎng)瓶上的，如果其上方存在細胞與其相粘附，那么下方的細胞很快就會缺乏營養(yǎng)餓死。不貼壁的一些原因：1.胰酶消化時間把控不當：消化不夠細胞本身就是成團的；若胰酶處理太久，容易造成細胞膜蛋白損傷，使細胞貼壁不緊，顯微鏡下觀察立體感不強，嚴重的時候甚至會造成細胞死亡。2.缺少貼壁因子：血清中

選擇適合實驗抗體技術(shù)方法綜述2024/01/22

檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，同時在后繼試驗中也會有不同的檢測方案，因此在選擇二抗的時候要綜合考慮一抗的類型及后繼檢測方案的要求，其中如何根據(jù)一抗的種屬來源和類型選擇二抗尤為重要。1.一抗的種屬來源：二抗應選用與使用的一抗相同的物種來源，例如：如果你的一抗是小鼠源的單克隆抗體，二抗則選抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可）；如果一抗是從兔血清里制備的兔源多克隆抗體，則相應的二抗需要選擇抗兔的二抗。即根據(jù)一抗的物種來源選擇相應的抗該物種的二抗。2.一抗是屬于哪個類或亞類除了要與

引物在PCR反應中幾個方面的作用歸納2024/01/15

PCR（聚合酶鏈反應）是一種常用的分子生物學技術(shù)，可用于擴增DNA序列。在PCR反應中，引物是起關(guān)鍵作用的短鏈DNA分子，它們會與待擴增DNA序列的兩端匹配，指示聚合酶在這些位置開始復制DNA。引物在PCR反應中的作用可以歸納為以下幾個方面：1.引物定義PCR擴增的目標序列：PCR擴增需要在待擴增DNA序列的兩端放置引物，引物的選擇和設(shè)計可以確保PCR擴增特定的DNA序列。引物的序列應該能夠與待擴增DNA序列的兩端互補匹配，以便在PCR反應中進行擴增。2.引物促進DNA序列的復制：一旦引物與待擴

實驗檢測結(jié)果的準確性把控詳細闡述2024/01/08

任何檢測均會產(chǎn)生檢測誤差，分析測試誤差來源很多，如，樣品的代表性、均勻性、穩(wěn)定性。質(zhì)量保證的任務就是把所有的誤差，包括：系統(tǒng)誤差、隨機誤差，減少到預期的水平。分析測試的質(zhì)量保證可分為取樣的質(zhì)量保證和分析檢測系統(tǒng)的質(zhì)量保證兩大方面。質(zhì)量保證的兩大方面取樣的質(zhì)量保證：樣品是從大量物質(zhì)中選取的一部分物質(zhì)；樣品的測定結(jié)果是總體特性量的估計值；由于總體物質(zhì)的不均勻性，用樣品的測定結(jié)果推斷總體，必然引入誤差，稱此誤差為取樣誤差；取樣誤差可分為隨機誤差和系統(tǒng)誤差；1、取樣的隨機誤差：由取樣過程中無法控制的隨機

酶免疫分析儀各類型的工作原理及基本結(jié)構(gòu)2023/12/26

酶免疫分析(enzymeimmunoassay，EIA)是目前臨床應用最多的一類免疫分析技術(shù)，可分為非均相(或異相)酶免疫測定和均相酶免疫測定兩種方法。均相酶免疫分析法（homogeneousenzymeimmunoassay，HEI）均相酶免疫分析主要有酶擴大免疫測定技術(shù)和克隆酶供體免疫測定兩種方法。非均相酶免疫分析法（heterogeneousenzymeimmunoassay）常用的酶免疫分析法多為非均相法，又可分為液相酶免疫法和固相酶免疫法兩種，以后者常用，稱為酶聯(lián)免疫吸附測定（enzy

DNA提取試劑盒試驗必看事項2023/12/18

一、RNA和DNA提?。毫呀猓毫呀夤娇赡芤蚰崛NA還是RNA而異，但共同點是含有高濃度離液鹽的裂解緩沖液。Chaotropes（離液劑）的作用：Chaotrope會破壞氫鍵及疏水間的相互作用。離液鹽包括鹽酸胍、硫氰酸胍、尿素和高氯酸鋰。洗滌劑：除了離液劑外，裂解緩沖液中通常還有一些去污劑，以幫助蛋白質(zhì)溶解和裂解。溶菌酶和蛋白酶K:根據(jù)樣品類型，也可以使用酶進行裂解。蛋白酶K就是其中之一，實際上在這些變性緩沖液中效果較好；當?shù)鞍踪|(zhì)變性增多，蛋白酶K的作用也會相應增強。然而，溶菌酶在變性中不