ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測定）樣本不顯色解讀2025/07/21

ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測定）中，如果標準品顯色但樣本不顯色，可能由以下幾個原因造成：1.樣本保存或處理不當：如果樣本在保存或處理過程中發(fā)生了降解，或者樣本中待檢測的抗原濃度過低，都可能導致樣本不顯色。2.抗體特異性或濃度問題：使用的捕獲抗體和檢測抗體可能與樣本中的抗原不匹配，或者抗體濃度不足，導致特異性結(jié)合不充分。3.孵育條件不適宜：孵育溫度、時間或緩沖液條件不適當，可能影響抗原抗體的結(jié)合效率。4.封閉不充分或封閉液問題：封閉步驟如果未充分進行，可能會導致非特異性結(jié)合增加，從而掩蓋了特異性信號

聚合酶鏈式反應（ PCR）技術循環(huán)檢測方法2025/07/15

聚合酶鏈式反應（PolymeraseChainReaction,PCR）是一種用于擴增特定DNA片段的分子生物學技術。其核心原理是模擬生物體內(nèi)的DNA復制過程，通過特定的引物、DNA聚合酶和dNTPs（脫氧核糖核苷酸）來實現(xiàn)目標DNA序列的指數(shù)級擴增。PCR技術的實現(xiàn)依賴于三個關鍵步驟的循環(huán)進行：一、變性（Denaturation）：在高溫（通常90-96℃）下，雙鏈DNA模板中的氫鍵斷裂，導致雙鏈分開為兩條單鏈。這是擴增過程中的第一步，也是將模板DNA變成單鏈狀態(tài)的過程。二、退火（Anneal

微生物菌種活化方法匯總2025/07/08

微生物菌種活化就是將保藏狀態(tài)的菌種放入適宜的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，逐級擴大培養(yǎng)是為了得到純而壯的培養(yǎng)物，即獲得活力旺盛的、接種數(shù)量足夠的培養(yǎng)物。菌種發(fā)酵有一般需要2-3代的復壯過程，因為保存時的條件往往和培養(yǎng)時的條件不相同，所以要活化,讓菌種逐漸適應培養(yǎng)環(huán)境。菌種活化是指將長期保存的菌種恢復到具有生長活力的狀態(tài)，以便于進一步的培養(yǎng)和使用。根據(jù)菌種的保存方式，活化方法可以分為以下幾種：1.凍干粉或載體保存形式的活化：首先，將凍干粉或載體保存的菌株加入少量生理鹽水或非選擇性肉湯培養(yǎng)基中進行溶解懸浮。使用劃線

ELISA實驗保存標本異常問題解析2025/07/03

ELISA酶聯(lián)免疫吸附實驗免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識別和結(jié)合原理，對待測抗體或者抗原進行分析測定的方法，酶聯(lián)免疫吸附分析（下稱ELISA）是免疫分析的一種，分三個部分組成：免疫識別，信號輸出和數(shù)據(jù)處理。ELISA試劑盒標本保存，在ELISA試劑盒實驗中是非常重要的。標本保存不當可能會導致實驗結(jié)果異常，如顏色背景深、非特異性染色、標準曲線不佳等問題。以下是一些解決這些問題的方法：1.顏色背景深/非特異性染色1)充分清洗酶標板：確保每個微孔的洗滌液量一致，清洗后

細胞培養(yǎng)的具體流程詳述2025/06/25

細胞培養(yǎng)是指將細胞從生物體中取出，置于合適的體外環(huán)境中，使其生長和繁殖的過程。這包括了原代培養(yǎng)（直接從生物體分離的細胞在人工培養(yǎng)環(huán)境中增殖）、傳代培養(yǎng)（將培養(yǎng)的細胞按一定比例稀釋并重新接種到新的培養(yǎng)器皿中）以及細胞系和細胞株的建立。細胞培養(yǎng)的關鍵在于提供適宜的營養(yǎng)、生長因子、激素、氣體環(huán)境（如5%CO2和37℃）以及維持合適的pH和滲透壓。細胞根據(jù)其生長特性可以分為貼壁生長和懸浮生長兩種類型。貼壁生長細胞需要附著在支持物表面才能生長，而懸浮生長細胞則可以在懸浮狀態(tài)下增殖。細胞培養(yǎng)過程中，需要關注

ELISA實驗中的洗板步驟關鍵環(huán)節(jié)2025/06/17

ELISA實驗是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識別和結(jié)合原理，對待測抗體或者抗原進行分析測定的方法，酶聯(lián)免疫吸附分析（下稱ELISA）是免疫分析的一種，分三個部分組成：免疫識別，信號輸出和數(shù)據(jù)處理。ELISA實驗中的洗板步驟是確保實驗結(jié)果準確的關鍵環(huán)節(jié)，涉及多個關鍵點：1.洗滌參數(shù)：-洗滌量：自動洗板機通常建議使用350µl的洗滌液來確保清洗整個反應孔的壁。洗滌量應比包被體積稍高，以減少未結(jié)合抗體的背景信號。-均勻性：所有反應孔的洗滌量必須一致，確保每次洗滌都達到相同的效果

抗體驗證方法策略探究2025/06/10

抗體驗證是確?？贵w在科學研究中具有特異性、準確性和可靠性的關鍵步驟。這一過程對于生物科研的成功至關重要，但很多科研人員卻忽視了其重要性。根據(jù)Nature在2016年發(fā)表的文章，盡管準確的實驗結(jié)果依賴于抗體的功效符合預期，但仍有將近三分之一的初級科學家們不進行任何抗體驗證。抗體驗證的重要性：1.避免假陽性與假陰性結(jié)果：表現(xiàn)糟糕的抗體會產(chǎn)生假陽性信號，即結(jié)合目標蛋白之外的其他蛋白，以及假陰性信號，即無法與正確的蛋白結(jié)合。這會導致科學家和期刊雜志撤回將要發(fā)表的論文，干擾科研工作并導致錯誤的研究結(jié)論。2

PCR電泳中的非特異性擴增避免策略匯總2025/06/04

PCR電泳中的非特異性擴增是指在聚合酶鏈式反應（PCR）擴增過程中，除了目的DNA片段外，還擴增出與目的條帶大小不一致的條帶，這些條帶可能大小不一，從幾條到十幾條都有可能。避免PCR電泳中的非特異性擴增可以通過以下策略：1.優(yōu)化引物設計：確保引物具有高特異性，避免引物自身形成二聚體。使用軟件設計引物時，應選擇保守區(qū)，長度在1827bp之間，上下游引物Tm值為6075℃，GC含量保持在40%60%之間，且引物間不應存在互補序列，以減少非特異性結(jié)合。2.調(diào)整退火溫度：通過梯度PCR確定最適退火溫度，

菌種保藏和復蘇具體的操作步驟2025/05/27

菌種保藏（culturepreservation，culturecollection）是保持微生物菌株活力和遺傳性狀的關鍵技術。在分子生物學研究中，經(jīng)過基因編輯或改造的菌種通常非常珍貴且微量，因此需要進行妥善的保藏。以下是具體的操作步驟：菌種保藏：1.將待保存的菌液與配好的甘油混合液按1:1比例混合，最終達到20%甘油濃度。配置40%（v/v）甘油滅菌水混合液。2.取2ml離心管或保菌管，加入500微升40%甘油-水混合液。3.用移液槍吸取500微升菌液，將槍頭深入液面以下緩緩加入。4.將離心管

使用ELISA洗板機洗板的關鍵點有哪些？2025/05/19

ELISA洗板機是專門用于清洗酶標板的儀器，能夠提高清洗效率和結(jié)果的一致性。以下是使用ELISA洗板機洗板的關鍵點：1.選擇合適的洗板機：1)關鍵指標：確保洗板機的殘留量≤2μL/孔，這是評價洗板效果的重要標準。2)洗板環(huán)境：選擇能提供不同洗板環(huán)境的設備，適應不同的實驗需求。3)可靠性：考察儀器的穩(wěn)定性和洗滌效果，以及售后服務和配件的充足性。2.洗板機的操作：1)參數(shù)設置：包括洗滌量、洗滌次數(shù)和抽吸高度。例如，使用350µl洗滌液進行洗滌，可以清潔整個反應孔的壁，洗滌次數(shù)通常在3次左右，以平衡背

對照品和標準品各方面比較盤點2025/05/14

對照品和標準品一樣是指國家藥品標準中用于鑒別、檢查、含量測定、雜質(zhì)和有關物質(zhì)檢查等標準物質(zhì)，它是國家藥品標準不可分割的組成部分。國家藥品標準物質(zhì)是國家藥品標準的物質(zhì)基礎，它是用來檢查藥品質(zhì)量的一種特殊的專用量具;是測量藥品質(zhì)量的基準;也是作為校正測試儀器與方法的物質(zhì)標準。在藥品檢驗中，它是確定藥品真?zhèn)蝺?yōu)劣的對照，是控制藥品質(zhì)量必須用的工具。一、概念：對照品與標準品是2個不同的概念，中國藥典凡例中已有明確的定義:文獻中常將2種概念混淆，認為對照品就是標準品，是1種物質(zhì)2種提法而已[1，2]，造成錯

實時熒光定量PCR(qPCR)技術基本原理介紹2025/05/07

實時熒光定量PCR（Real-timequantitativePCR,qPCR）是一種在PCR反應體系中加入熒光標記物，通過實時監(jiān)測每個PCR循環(huán)中的熒光信號變化，實現(xiàn)對起始模板量的定量分析的技術。這項技術由美國AppliedBiosystems公司在1995年推出，標志著PCR技術從定性分析到定量分析的飛躍。實時熒光定量PCR（qPCR）的基本原理包括三個主要階段，這些階段反映了PCR擴增過程中的熒光信號變化：1、基線期：在PCR反應開始時，熒光信號幾乎不變，主要是因為背景熒光的存在掩蓋了PC

成纖維細胞生長因子 2（FGF - 2）ELISA 試劑盒功能作用2025/04/28

成纖維細胞生長因子2（FGF-2），又稱為堿性成纖維細胞生長因子（bFGF），是一種在生物體內(nèi)具有廣泛生物學活性的蛋白質(zhì)。FGF-2是一種多肽生長因子，由155個氨基酸殘基組成，相對分子質(zhì)量約為18kDa。它具有典型的FGF家族結(jié)構(gòu)特征，包括一個核心的β-折疊結(jié)構(gòu)域，以及一些α-螺旋和環(huán)結(jié)構(gòu)，這種結(jié)構(gòu)有助于FGF-2與受體結(jié)合并發(fā)揮作用。功能作用：1、促進細胞增殖：FGF-2對多種細胞類型具有促進增殖的作用，包括成纖維細胞、內(nèi)皮細胞和神經(jīng)細胞等。在創(chuàng)傷修復過程中，F(xiàn)GF-2能夠刺激成纖維細胞的增

ELISA酶聯(lián)免疫吸附試驗洗滌過程詳述2025/04/21

ELISA（EnzymeLinkedImmunosorbentAssay）酶聯(lián)免疫吸附試驗優(yōu)化的重點之一在于洗滌。洗滌步驟可降低未結(jié)合抗體所引起的背景信號，從而增加分析的信噪比。每一步之間的洗滌確保只有特異的結(jié)合事件被保留，在最后一步產(chǎn)生信號。而不充分的洗滌會導致差異和高背景，從而帶來不理想的結(jié)果。下面將為你介紹一些利用自動洗板機來洗滌ELISA平板的技巧。免疫分析，比如ELISA，一般包含兩個或以上的孵育步驟，中間以洗滌隔開。ELISA通常在96孔板中開展，其上包被了結(jié)合抗原或抗體。在封閉步驟

生化試劑盒試驗問題解析2025/04/15

1.生化試劑盒的測定原理？生化試劑盒通過化學反應/酶促反應或物質(zhì)結(jié)構(gòu)特點測定樣本中物質(zhì)含量或酶活；所用儀器一般為分光光度計和酶標儀，兩者的測定原理都是朗伯比耳定律:A=kbc，即當適當波長的一束平行單色光照射固定濃度均勻溶液時，其吸光度與光通過的液層厚度成正比。土壤、水質(zhì)、動植物組織、血清、細胞細菌、食品等樣本均可以進行測定。2.如何選擇不同規(guī)格的試劑盒？首先根據(jù)本實驗的實際情況選擇，實驗室有酶標儀的且有該檢測波長的可以選擇微量法試劑盒；實驗室有分光光度計的，且有相應規(guī)格的比色皿既可以選擇常量法

PCR實驗室被污染處理探究2025/04/08

有實驗室的地方，就不可避免的會出現(xiàn)實驗室污染。實驗室的污染，不僅會影響實驗與科研的質(zhì)量和效果,還對實驗室工作人員的身體健康有損害，現(xiàn)在來一起了解下PCR實驗室的污染原因及解決方法。一、PCR實驗室污染分類：標本間交叉污染：標本污染主要有收集標本的容器被污染，或標本放置時，由于密封不嚴溢于容器外，或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染；標本核酸模板在提取過程中，由于吸樣槍污染導致標本間污染;有些微生物標本尤其是病毒可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴散，導致彼此間的污染。PCR試劑的污染：主要是由于在PCR試

聚合酶鏈式反應（PCR）條件溫度和時間設置2025/04/01

聚合酶鏈式反應（PCR）原理是生物學的聚合酶鏈反應。PCR技術的基本原理類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫（經(jīng)常是60°C左右）時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結(jié)合，再調(diào)溫度至DNA聚合酶最適反應溫度（72°C左右），DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。PCR反應條件的選擇技巧主要體現(xiàn)在溫度、時間和循環(huán)次數(shù)上，溫度過高，延伸時間不夠都會對實驗結(jié)果有很大的影響，以下總結(jié)方法技

化學實驗室安全性具體防護措施2025/03/24

在實驗室做實驗，一定要注意實驗的安全，畢竟化學藥品大多數(shù)都是電郵一定毒性的，一旦出現(xiàn)問題，影響不容小覷，甚至可能會危及生命?；瘜W實驗室個人防護措施：1、眼睛及臉部的防護（1）、全防護眼鏡（眼睛及臉部是實驗室中最易被事故所傷害的部位，因而對他們的保護尤為重要。實驗室內(nèi)，氖實驗人員必須戴安全防護眼鏡（2）、當化學物質(zhì)濺入眼睛后，應立即用水徹di沖洗。沖洗時，應將眼皮撐開，小心地用自來水沖洗數(shù)分鐘，再用蒸餾水沖，然后去醫(yī)務室進行治療。（3）、面部防護用具用于保護臉部和喉部。為了防止可能的爆炸及實驗產(chǎn)生

微生物培養(yǎng)基應用必看干貨匯集2025/03/17

培養(yǎng)基是液體、半固體或固體形式的，含天然或合成成分，用于保證微生物繁殖或保持其活力的物質(zhì)。培養(yǎng)基的制備和使用是微生物實驗室檢測工作的重要環(huán)節(jié)，培養(yǎng)基自身質(zhì)量的優(yōu)劣、保存是否得當、配制使用是否正確等都直接影響到檢測結(jié)果的準確性。一、培養(yǎng)基的購置與驗收1.購置從培養(yǎng)基自身的質(zhì)量來看，不同生產(chǎn)廠家的產(chǎn)品，甚至同一廠家不同批號的產(chǎn)品都會存在差異。依據(jù)ISO/IEC17025《檢測和校準實驗室能力的通用要求》，對培養(yǎng)基的供應企業(yè)進行評價后選擇合格的供應商，這是培養(yǎng)基購買過程中重要的步驟。應選擇產(chǎn)品市場信譽

蛋白磷酸化檢測方法優(yōu)缺點分述2025/03/11

蛋白激酶將磷酸基團從ATP轉(zhuǎn)移到蛋白多肽底物上的絲氨酸、蘇氨酸或酪氨酸殘基，直接影響目標的活性和功能。放射性研究表明，真核細胞中大約30%的蛋白經(jīng)過磷酸化修飾。這一關鍵的翻譯后修飾調(diào)控了廣泛的細胞活性，包括細胞周期、分化、代謝和神經(jīng)元通訊。此外，異常的磷酸化事件與許多疾病狀態(tài)相關。在評估磷酸化時，選擇的方法可能會有所不同，這取決于多個因素，包括提出的具體問題以及特殊儀器或試劑的可用性。如何檢測蛋白磷酸化，本文簡要介紹了幾種常用方法，并提出了每種方法的優(yōu)點和缺點。激酶活性分析蛋白激酶通常是多個信號