【藥典】生物藥-SCX-MS直聯(lián)用于九種單抗的電荷異構(gòu)體分析

單克隆抗體（簡稱單抗）具有選擇性好、靶向性強(qiáng)、臨床效果 好等特點(diǎn)。由于單抗具有的這些小分子藥物難以匹敵的優(yōu)勢(shì)， 單抗受到研發(fā)者和醫(yī)藥市場(chǎng)的青睞。截止2022年7月，在中國 批準(zhǔn)上市的國產(chǎn)單抗36個(gè)，進(jìn)口單抗46個(gè)。國際上上市的單抗 超過110種，相比國際單抗種類，中國單抗市場(chǎng)還有較大增長 空間。 在單抗的發(fā)酵、純化和存儲(chǔ)過程中，因?yàn)槊富蛘叻敲傅臈l件， 導(dǎo)致單抗存在一系列翻譯后修飾，例如糖基化、糖化、氧化、 脫酰胺和K丟失等。大量文獻(xiàn)研究表明，這些翻譯后修飾的不同 對(duì)單抗的安全性和有效性存在較大的影響。例如，隨著糖化水 平的增加[1-4]，容易導(dǎo)致抗體表面正電荷減少，從而導(dǎo)致抗體 聚集體的增加。此外，糖化后的抗體也容易進(jìn)一步反應(yīng)，例如 羧甲基化，導(dǎo)致抗體顏色的變化[5]。又如，輕鏈N30的脫酰胺 造成赫賽汀輕微的效價(jià)丟失[6]，重鏈N55的脫酰胺造成該藥物 效價(jià)的顯著降低[7]。雖然沒有報(bào)道表明K Loss的比例與抗體的 活性有直接關(guān)系，但K loss比例的不同會(huì)造成抗體藥物批次一致 性的差異。 在這些翻譯后修飾中，很多會(huì)導(dǎo)致抗體電荷的變化，即形成電 荷異構(gòu)體。傳統(tǒng)的的電荷異構(gòu)體分離方法包括離子交換和電泳 法。兩種方法分離機(jī)理不同，離子交換法根據(jù)抗體表面電荷的 不同進(jìn)行分離，而電泳法如iCIEF根據(jù)抗體凈電荷的不同進(jìn)行 分離。定性酸堿組分，研究其來源有利于抗體工藝的優(yōu)化。因 此，隨著抗體行業(yè)的不斷優(yōu)化，對(duì)酸堿變異體的定性分析需求 日益增長。常規(guī)的離子交換法和iCIEF法都用UV作為檢測(cè)器。但 UV檢測(cè)器僅依靠保留時(shí)間定性，無法對(duì)沒有對(duì)照品的組分進(jìn)行 歸屬。由于常規(guī)離子交換法和iCIEF方法使用難揮發(fā)性的鹽作為 流動(dòng)相或者添加劑，造成這兩種方法難以與MS兼容。如離子交 換法用氯化鈉和磷酸鹽作為流動(dòng)相添加劑，iCIEF方法使用甲基 纖維素和尿素作為添加劑。發(fā)展MS兼容的電荷異構(gòu)體分離方法 對(duì)抗體行業(yè)的生產(chǎn)技術(shù)優(yōu)化和抗體質(zhì)量研究有著重要的意義，因此，近年來各研究結(jié)構(gòu)和研究人員開始關(guān)注該領(lǐng)域。 2018年，ThermoFisher的研究人員Ken Cook等發(fā)表了一種以 pH梯度為基礎(chǔ)的SCX-MS方法，用于單抗的電荷異構(gòu)體分析[8] 。為了方便中國讀者研究和使用該方法，本文將這個(gè)方法的一 些細(xì)節(jié)進(jìn)行分享，并將這個(gè)方法用于9種單抗 的電荷異構(gòu)體分析，為抗體企業(yè)用戶提供參考。

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