【藥典】生物藥-重組蛋白的HCP定性和定量分析方法思考——從前處理到數(shù)據(jù)分析

重組蛋白類藥物由遺傳修飾的原核或真核宿主細(xì)胞培養(yǎng)/發(fā)酵 產(chǎn)生。在目標(biāo)蛋白的發(fā)酵過程中，由于宿主細(xì)胞的凋亡/死亡/ 裂解，宿主細(xì)胞產(chǎn)生的其它蛋白質(zhì)也可能釋放到細(xì)胞培養(yǎng)基/ 發(fā)酵液中，即為宿主細(xì)胞蛋白（HCP）。HCP可能會引起機(jī)體 免疫反應(yīng)，從而產(chǎn)生類佐劑作用——增強(qiáng)機(jī)體對藥物的免疫應(yīng) 答。HCP也可能是一些酶類，具有分解目標(biāo)蛋白或人體蛋白的 作用，導(dǎo)致藥物不穩(wěn)定或進(jìn)入人體后引發(fā)一系列不良反應(yīng)。因 此，生物制藥公司不斷優(yōu)化純化工藝，從而控制終產(chǎn)品中HCP 的種類和含量。 目前常用的HCP檢測方法為酶聯(lián)免疫法（ELISA）。該方法具 有較高的靈敏度，但也存在一些局限性。LC-MS方法是ELISA 的有利補(bǔ)充。與ELISA相比，LC-MS方法具有以下優(yōu)點(diǎn)：第 一，可以鑒定HCP的種類；第二，可以獲得單個HCP的含量信 息；第三，可用于不同工藝所得產(chǎn)品的橫向?qū)Ρ取Ｓ捎贚C-MS 的以上優(yōu)點(diǎn)，LC-MS作為HCP的檢測受到廣泛關(guān)注和使用。例 如，Huang等[1]以NIST mab為例，發(fā)展了基于LC-MS檢測HCP 的前處理方法。LC-MS在HCP檢測中的廣泛使用，推動了相 關(guān)分離、檢測和數(shù)據(jù)分析技術(shù)的發(fā)展。但多樣的技術(shù)選擇也為 HCP的分析帶來一些疑問： 第一、 大部分關(guān)于HCP的研究均以抗體為分析對象。在抗體 的分析中，native酶解可有效抑制主蛋白的酶切，從而提升HCP 的鑒定。在生物制藥中，除抗體以外，還有大量的重組蛋白產(chǎn) 品，這些產(chǎn)品的酶解應(yīng)該采用什么前處理方法？ 第二、 在HCP的檢測中有nanoLC-MS和UHPLC-MS兩種分離 檢測方法，這兩種方法各自的優(yōu)缺點(diǎn)是什么，應(yīng)該選擇哪一種 方法？ 第三、 常聽人說，DIA采集數(shù)據(jù)有利于提升鑒定量，是否用 DIA采集HCP可顯著提升HCP鑒定量？

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